2017年執(zhí)業(yè)藥師考試藥物分析復(fù)習(xí)要點(diǎn)第六章色譜法

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　　色譜法是一種物理或物理化學(xué)分離分析方法。先將混合物中各組分分離而后逐個(gè)分析，是分析混合物最有力的手段。具有高靈敏度、高選擇性、高效能、分析速度快、應(yīng)用范圍廣等優(yōu)點(diǎn)(環(huán)球網(wǎng)校分享2017年執(zhí)業(yè)藥師考試藥物分析復(fù)習(xí)要點(diǎn)第六章色譜法)。

　　色譜過(guò)程是物質(zhì)分子在相對(duì)運(yùn)動(dòng)的兩相(固定相和流動(dòng)相)間分配平衡的過(guò)程，可用分配系數(shù)K和容量因子k描述。

　　例題：色譜過(guò)程使物質(zhì)分子在; A.溶液中達(dá)到平衡的過(guò)程B. 兩相中平衡的過(guò)程C. 固定相中分配的過(guò)程 D. 流動(dòng)相中溶解的過(guò)程

　　E. 相對(duì)運(yùn)動(dòng)的兩相(流動(dòng)相與固定相)間分配平衡的過(guò)程 答案: E

　　1.分配系數(shù)K=Cs/Cm，與組分、固定相和流動(dòng)相性質(zhì)和溫度有關(guān)。

　　2.容量因子k=Ws/Wm，不僅與組分、固定相和流動(dòng)相性質(zhì)和溫度有關(guān)，還與兩相體積有關(guān)。容量因子不等是色譜分離的先決條件。

　　3.色譜過(guò)程方程：保留時(shí)間與分配系數(shù)關(guān)系tR=t0(1+k)

　　第一節(jié) 薄層色譜法

　　掌握薄層色譜法的基本原理、操作方法以及在藥物鑒別、檢查中的應(yīng)用。

　　一、基本原理

　　1.吸附薄層色譜：吸附劑對(duì)不同組分A和B具有不同吸附能力，展開(kāi)劑也對(duì)A和B有不同溶解、解吸能力，當(dāng)展開(kāi)劑不斷展開(kāi)， A、B在吸附劑和展開(kāi)劑之間連續(xù)不斷吸附解吸，產(chǎn)生差速遷移得到分離。

　　2.比移值：Rf=l/l0，為組分遷移距離與展開(kāi)劑遷移距離之比

　　比移值的最佳范圍是0.3～0.5，可用范圍是0.2～0.8。

　　影響比移值因素：①被分離物質(zhì)的結(jié)構(gòu)和性質(zhì)。極性較強(qiáng)的組分Rf較小。②薄層板性質(zhì)。吸附劑活性越強(qiáng)，吸附作用就越強(qiáng)，Rf越小。③展開(kāi)劑性質(zhì)。極性越強(qiáng)展開(kāi)劑Rf值增大④展開(kāi)劑蒸氣飽和度對(duì)Rf也有較大影響。

　　3.分離度：R=2d/(W1+W2)，兩相鄰斑點(diǎn)中心距離與兩斑點(diǎn)平均寬度的比值

　　二、操作方法

　　1.吸附劑和展開(kāi)劑的選擇

　　(1)吸附劑：常用有硅膠、氧化鋁、聚酰胺、硅藻土等。硅膠、氧化鋁的活性與含水量有關(guān)，含水量高，活性低，吸附力弱;聚酰胺表面的酰胺基可形成氫鍵，選擇性高。

　　(2)展開(kāi)劑：極性較強(qiáng)的展開(kāi)劑適用于極性較強(qiáng)組分的洗脫;極性較弱的展開(kāi)劑適用于極性較弱組分的洗脫。加入少量酸、堿可以使極性物質(zhì)斑點(diǎn)集中，減少拖尾，提高分離度。

　　選擇一般原則是，分離極性較強(qiáng)組分時(shí)選用活性低的薄層板，以極性強(qiáng)的展開(kāi)劑展開(kāi)。分離弱極性組分時(shí)，宜選用活性高的薄層板，以極性弱的展開(kāi)劑展開(kāi)。調(diào)整待測(cè)組分Rf0.3～0.5范圍內(nèi)。

　　2.薄層板制備：1份固定相與3份水混和涂布，110℃烘30分鐘。

　　3.點(diǎn)樣與展開(kāi)：點(diǎn)樣一般為直徑2～4mm圓點(diǎn)，距底2.0cm;展開(kāi)距離一般為10～15cm。

　　4.斑點(diǎn)定位：有色可直接觀察;有熒光在紫外燈下觀察;噴灑顯色劑使組分顯色。

　　三、應(yīng)用 1.鑒別：比較供試品與對(duì)照品溶液的比移值 2.雜質(zhì)檢查：雜質(zhì)對(duì)照品比較法;高低濃度對(duì)比法

　　第二節(jié) 氣相色譜法和高效液相色譜法

　　掌握氣相色譜法和高效液相色譜法的基本原理;色譜系統(tǒng)適用性試驗(yàn)的主要內(nèi)容;氣相色譜法和高效液相色譜法在藥物鑒別、檢查和含量測(cè)定中的應(yīng)用。了解氣相色譜儀和高效液相色譜儀的基本結(jié)構(gòu)。

　　一、氣相色譜法： 以氣體為流動(dòng)相的色譜法，具有分離效能高、靈敏度高、樣品用量少、分析速度快等優(yōu)點(diǎn)，不適用于難揮發(fā)和熱穩(wěn)定性差的物質(zhì)分析。

　　(一)基本原理

　　1.基本概念

　　色譜峰參數(shù)：峰高或峰面積(用于定量)，峰位(保留值表示，用于定性)，峰寬(用于衡量柱效)

　　保留值：保留時(shí)間、死時(shí)間、調(diào)整保留時(shí)間

　　峰寬：標(biāo)準(zhǔn)差、半峰寬、峰寬

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　　2.塔板理論：把組分在兩相間的連續(xù)轉(zhuǎn)移過(guò)程，分解為間歇的在單個(gè)塔板中的分配平衡過(guò)程

　　理論塔板數(shù) n=5.54(tR/Wh/2)2

　　色譜柱的理論塔板數(shù)越多，柱效越高;同樣長(zhǎng)度中塔板高度越小，柱效越高(環(huán)球網(wǎng)校分享2017年執(zhí)業(yè)藥師考試藥物分析復(fù)習(xí)要點(diǎn)第六章色譜法)。

　　3.速率理論：主要說(shuō)明使色譜峰擴(kuò)張而降低柱效的因素

　　范氏方程 H=A+B/μ+Cμ

　　A為渦流擴(kuò)散項(xiàng)。采用適當(dāng)粒度、均勻的填料并填充均勻可減小渦流擴(kuò)散，開(kāi)管毛細(xì)管柱A=0

　　B為縱向擴(kuò)散系數(shù)。為減小縱向擴(kuò)散可采用較高的載氣流速;或選擇分子量大的重載氣;也可降低柱溫。

　　C為傳質(zhì)阻抗系數(shù)。在能完全覆蓋載體表面的前提下，應(yīng)適當(dāng)減少固定液用量。

　　范氏方程說(shuō)明填充均勻程度、載體粒度、載氣種類、載氣流速、柱溫、固定液層厚度對(duì)柱效的影響。

　　(二)氣相色譜儀

　　1.氣源：FID常用載氣多為氮?dú)饣蚝?TCD多用氦氣或氫氣為載氣;ECD多用氮?dú)饣驓鍤?/p>

　　2.進(jìn)樣及汽化系統(tǒng)

　　3.色譜柱和柱溫箱

　　4.檢測(cè)器

　　熱導(dǎo)檢測(cè)器TCD：濃度型檢測(cè)器。構(gòu)造簡(jiǎn)單、測(cè)定范圍廣、樣品不破壞，但靈敏度較低。

　　電子捕獲檢測(cè)器ECD：靈敏度高、選擇性好。對(duì)無(wú)電負(fù)性基團(tuán)的化合物響應(yīng)低。

　　氫離子火焰檢測(cè)器FID：質(zhì)量型檢測(cè)器。靈敏度高、響應(yīng)快、線性范圍寬，最常用。

　　(三) 應(yīng)用 1.鑒別：利用保留值進(jìn)行鑒別。

　　2.檢查

　　(1) 內(nèi)標(biāo)法加校正因子測(cè)定供試品中某個(gè)雜質(zhì)含量

　　(2) 外標(biāo)法測(cè)定供試品中某個(gè)雜質(zhì)或主成分含量

　　(3) 加校正因子的主成分自身對(duì)照法

　　(4) 不加校正因子的主成分自身對(duì)照法

　　(5) 面積歸一化法：一般不用于微量雜質(zhì)檢查

　　3.含量測(cè)定：外標(biāo)法，內(nèi)標(biāo)法

　　內(nèi)標(biāo)物要求：①原樣品中不含有的組分;②保留時(shí)間與待測(cè)組分相近，但能完全分離;③純度合乎要求。

　　二、高效液相色譜法

　　(一)速率理論：高效液相色譜法中影響柱效主要因素為渦流擴(kuò)散項(xiàng)和傳質(zhì)阻抗項(xiàng)。由于液體黏度比載氣大得多，而且柱溫多為室溫，其縱向擴(kuò)散項(xiàng)很小，可忽略不計(jì)。范氏方程簡(jiǎn)化為 H=A +Cμ

　　(二) 高效液相色譜儀： 1.高壓輸液泵 2.色譜柱：分析型和制備型 3.進(jìn)樣閥 4.檢測(cè)器：①固定波長(zhǎng)檢測(cè)器;②可變波長(zhǎng)檢測(cè)器;③光二極管陣列檢測(cè)器

　　(三)應(yīng)用：與氣相色譜法相似

　　三、色譜系統(tǒng)適用性試驗(yàn)方法

　　1.理論塔板數(shù)：不得低于各品種項(xiàng)下規(guī)定的最小理論塔板數(shù)

　　2.分離度：除另有規(guī)定外，分離度應(yīng)大于1.5

　　3.重復(fù)性：取各品種項(xiàng)下對(duì)照品2連續(xù)進(jìn)樣5次，除另有規(guī)定外，其峰面積測(cè)量值的相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差不大于2.0%

　　4.拖尾因子：除另有規(guī)定外，拖尾因子應(yīng)在0.95～1.05之間

　　第三節(jié) 電泳法

　　熟悉電泳法的基本原理和常用的電泳方法。

　　了解毛細(xì)管電泳法的基本原理。

　　一、基本原理

　　電泳遷移速度 ν=μE

　　在相同電場(chǎng)強(qiáng)度下，兩組分分離程度取決于二者淌度之差。電泳分離后各組分的相對(duì)位置由組分的電泳泳動(dòng)和緩沖液電滲共同決定。

　　影響電泳分離的條件包括：

　　1.緩沖液的pH值和離子強(qiáng)度：pH直接影響組分的荷電情況，是電泳分離的最重要條件。離子強(qiáng)度太小則緩沖容量不足，區(qū)帶易擴(kuò)散;太大則組分移動(dòng)慢，發(fā)熱嚴(yán)重。

　　2.電場(chǎng)強(qiáng)度：電場(chǎng)強(qiáng)度越大分離越完全，大于20V/cm時(shí)發(fā)熱嚴(yán)重。

　　3.樣品濃度：通常以1%為宜。太濃拖尾，太稀測(cè)定結(jié)構(gòu)精密度差。

　　二、各類電泳法

　　1.紙電泳法 2.醋酸纖維素電泳法 3.瓊酯糖凝膠電泳法 4.聚丙烯酰胺凝膠電泳法 5.SDS聚丙烯酰胺凝膠電泳法

　　三、毛細(xì)管電泳法

　　以彈性石英毛細(xì)管為分離通道，以高壓直流電場(chǎng)為驅(qū)動(dòng)力，依照樣品中各組分之間淌度和分配行為的差異而實(shí)現(xiàn)分離的方法。

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