2022檢驗(yàn)主管技師高頻考點(diǎn)：酶活性測定的常見方法

2022檢驗(yàn)主管技師高頻考點(diǎn)：酶活性測定的常見方法

(1)定時法：(兩點(diǎn)法)

通過測定酶反應(yīng)開始后某一時間段內(nèi)(t1到t2)產(chǎn)物或底物濃度的總變化量來求取酶反應(yīng)初速度的方法。其中t1往往取反應(yīng)開始的時間。

酶與底物在一定溫度下作用一段固定的時間，通過加入強(qiáng)酸、強(qiáng)堿、蛋白醫(yī)學(xué)教育網(wǎng)整理沉淀劑等，使反應(yīng)完全停止(也叫中止反應(yīng)法)。加入試劑進(jìn)入化學(xué)反應(yīng)呈色測出底物和產(chǎn)物的變化。

該法最基本的一點(diǎn)是停止反應(yīng)后才測定底物或物的變化。

優(yōu)點(diǎn)：簡單易行，對試劑要求不高。

缺點(diǎn)：難保證測定結(jié)果的真實(shí)性。

難以確定反應(yīng)時間段酶促反應(yīng)是否處于線性期。隨著保溫時間的延續(xù)，酶變性失活加速。

(2)連續(xù)監(jiān)測法：

又稱為動力學(xué)法或速率法、連續(xù)反應(yīng)法。

在酶反應(yīng)過程中，用儀器監(jiān)測某一反應(yīng)產(chǎn)物或底物濃度隨時間的變化所發(fā)生的改變，通過計算求出酶反應(yīng)初速度。

連續(xù)監(jiān)測法根據(jù)連續(xù)測得的數(shù)據(jù)，可選擇線性期的底物或產(chǎn)物變化速率用于計算酶活力。

因此連續(xù)監(jiān)測法測定酶活性比定時法更準(zhǔn)確。

實(shí)際工作中，采用工具酶的酶偶聯(lián)法已經(jīng)成為醫(yī)學(xué)教育網(wǎng)整理應(yīng)用最廣、最頻繁測酶活性濃度的方法。

(3)平衡法：

通過測定酶反應(yīng)開始至反應(yīng)達(dá)到平衡時產(chǎn)物或底物濃度總變化量來求出酶活力的方法，又叫終點(diǎn)法。

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