2015主管檢驗技師考試：中性粒細(xì)胞功能的檢測

　　(一)細(xì)胞運動功能的檢測

　　小吞噬細(xì)胞的運動可以分成隨機運動和定向運動，前者類似于布朗運動。檢測方法是將采集的白細(xì)胞懸液滴于玻片上，用光學(xué)顯微鏡直接觀察其運動。也可用毛細(xì)血管法將細(xì)胞懸液裝入硅化毛細(xì)血管中，稍加離心，使細(xì)胞沉積在一端，切去無細(xì)胞的毛細(xì)血管段，繼而移放在含細(xì)胞培養(yǎng)液的培養(yǎng)小瓶中，37℃溫育18～20h，游動的細(xì)胞將從毛細(xì)血管內(nèi)外移，在管口形成一細(xì)胞團，根據(jù)細(xì)胞面積可判斷受檢中性粒細(xì)胞活動的強弱。某些患者中性粒細(xì)胞的任意運動明顯減弱，甚至消失。中性粒細(xì)胞的定向運動表現(xiàn)為趨化運動，測定方法有多種，其原理相同，而方法大同小異，常用以下兩法：

　　1.Boyden小室法又稱濾膜小室法，采用特殊的小盒裝置，盒中以一片3～5μm孔徑的微孔濾膜將盒分為上下兩小室。上室加受檢的白細(xì)胞懸液;下室加細(xì)菌菌體或其產(chǎn)物、酵母菌活化的血清等趨化因子。置37℃溫育數(shù)小時。上室中的中性粒細(xì)胞因受下室內(nèi)趨化因子的招引，使細(xì)胞由濾膜微孔進入濾膜內(nèi)，最后取濾膜，經(jīng)固定、干燥、著染、脫色等步驟，將透明后的濾膜置油鏡下檢測細(xì)胞在膜內(nèi)通過的距離，求其趨化單位。

　　2.瓊脂糖凝膠平板法將含小牛血清的1%瓊脂糖傾到在玻片或平皿中制成凝膠平板，繼而按圖22-1打孔，每三孔為一組，中央孔加細(xì)胞懸液，兩側(cè)孔分別加趨化因子或?qū)φ张囵B(yǎng)液，經(jīng)37℃溫育2～3h后，用2%戊二醛固定，移去瓊脂糖層，經(jīng)染色后，測量細(xì)胞運動的距離，按下式計算移動指數(shù)。

　　移動指數(shù)=趨化移動距離/任意移動距離

　　(二)吞噬和殺菌功能的檢測

　　檢測原則是將受檢細(xì)胞懸液按一定比例混和，繼加活的白色念珠菌懸液，保溫生，加美藍溶液作活體染色，取樣涂片鏡檢。如胞內(nèi)白色念珠菌呈藍色，表示該菌已被殺死，共計100200個細(xì)胞，分別求其吞噬率和殺菌率。

　　溶細(xì)胞法更能直接反映細(xì)胞殺菌的情況，將受檢的細(xì)胞懸液與一定量已經(jīng)新鮮人血清調(diào)理過的大腸桿菌或金黃色葡萄球菌懸液混合后，置37℃，每隔一定時間取定量培養(yǎng)物，稀釋后接種固體平板培養(yǎng)基，37℃培養(yǎng)18h后，計算菌落數(shù)，據(jù)以計算中性粒細(xì)胞的殺菌能力：

　　正常情況下，對大腸桿菌的殺菌率約為90%，對金黃色葡萄球菌的殺菌率約為85%。

　　在臨床常用的硝基四氮唑藍(NBT)還原試驗，本法用以檢測中性粒細(xì)胞的胞內(nèi)殺菌能力，由于中性粒細(xì)胞在殺菌過程中能量消耗劇增，耗氧量亦隨之相應(yīng)增加，磷酸己糖旁路代謝活力增強，葡萄糖6-磷酸氧化脫氫，此時加入NBT可接受所脫的氫，使原先呈淡黃包的NBT還原成點狀或塊狀甲朊顆粒并沉積在胞漿內(nèi)。NBT還原反應(yīng)式如下：

　　近此年來還采用了新穎的化學(xué)發(fā)光法，中性粒細(xì)胞在吞噬經(jīng)調(diào)理的金黃色葡萄球菌過程中，伴有化學(xué)發(fā)光的產(chǎn)生，故可用化學(xué)發(fā)光儀測定中性粒細(xì)胞的吞噬功能及其代謝活性。實驗證明全血化學(xué)發(fā)光試驗可同時獲得兩種信息，即中性粒細(xì)胞的吞噬功能、代謝活性及受檢血清的調(diào)理功能。由于中性粒細(xì)胞的氧代謝活性與對細(xì)胞的吞噬率密切相關(guān)，殺菌能力與發(fā)光強度相平行，因此化學(xué)發(fā)光法可檢測細(xì)胞殺菌功能。因此吞噬細(xì)胞化學(xué)發(fā)光測定法可用以研究中性粒細(xì)胞的吞噬功能，代謝活性和血清調(diào)理功能，它可在生理溫度和中性環(huán)境下測定，能較好地反映生理條件下吞噬細(xì)胞的功能，具有準(zhǔn)確靈敏、樣品用量少，簡便快速等優(yōu)點。其敏感性高于NBT還原試驗。

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