初級(jí)檢驗(yàn)技士輔導(dǎo):微生物學(xué)檢查方法
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初級(jí)檢驗(yàn)技士輔導(dǎo):微生物學(xué)檢查方法
微生物學(xué)檢查方法與原理
1、標(biāo)本采集:根據(jù)鏈球菌感染所致疾病不同,可采集濃汁、咽拭、痰、血、尿等標(biāo)本。
2、檢驗(yàn)方法及鑒定:
(1)直接鏡檢:革蘭染色,如符合鏈球菌的形態(tài)特征可初報(bào)。
(2)直接檢測(cè)抗原。
(3)分離培養(yǎng):血液標(biāo)本,以無菌操作取兩份血液各8-10ml,分別注入肉湯培養(yǎng)基,分別置氧和厭氧環(huán)境中增菌,有細(xì)菌生長(zhǎng),再分別接種于兩個(gè)血平板,置需氧和厭氧環(huán)境中培養(yǎng)。濃汁和咽拭標(biāo)本接種血平板并涂片染色鏡檢,若形態(tài)酷似鏈球菌,并革蘭陽性,可初報(bào)。上述的培養(yǎng)物經(jīng)35℃18-24小時(shí)培養(yǎng)后,觀察菌落特征和溶血情況。鏈球菌的菌落通常較小,透明或半透明,似針尖大小、凸起,菌落周圍可出現(xiàn)α-溶血或β-溶血,也可不出現(xiàn)溶血。然后取可疑菌落經(jīng)涂片、染色鏡檢證實(shí)。甲型溶血性鏈球菌和肺炎鏈球菌可產(chǎn)生α-溶血,它們的菌落形態(tài)非常相似,應(yīng)以區(qū)別。
(4)鑒定
1)膽汁七葉苷試驗(yàn):因D鏈球菌能在40%膽汁培養(yǎng)基中生長(zhǎng),并可分解七葉苷,使培養(yǎng)基變黑。
2)Optochin敏感性試驗(yàn):幾乎所有的肺炎鏈球菌株都對(duì)Optochin敏感,而其他鏈球菌通常不被其所抑制。
3)馬尿酸鹽水解試驗(yàn):B群鏈球菌具有馬尿酸酶,使馬尿酸水解。
4)CAMP試驗(yàn):羊血平板上B群鏈球菌與金葡菌協(xié)同形成箭頭狀溶血。
5)桿菌肽酶敏感試驗(yàn):化膿型鏈球菌為陽性。
6)血清分群分型。
7)豬鏈球菌檢測(cè):用API20Strep生化鑒定系統(tǒng)鑒定,血清學(xué)分群分型。采用PCR技術(shù)檢測(cè)豬鏈球菌毒力基因MRP及EF,PCR檢測(cè)編碼谷氨酸脫氫酶的基因片斷。
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